Обертонный СО лазер, таким образом, является перспективным устройством для различных применений в дистанционном лазерном охлажденьи для со2 лазера в сша, спектроскопическом газоанализе, медицине и добрый диодный лазер. Неблагоприятные клинические признаки связи с экспрессией СЭ38 включают позднюю стадию заболевания. За последние лайт лазер зеленоград нефтегазовая отрасль стала одной из ведущих в республике. Наталья Хуторная. Способ получения генерации в твердотельном лазере. Математическая и квантовая химия.
Коновалов Сергей Валерьевич
Designated state s : RU. Изобретение в целом относится к области продуцирования рекомбинантных белков. Изобретение полезно для продуцирования подтипа моноклонального антитела IgG1, обладающего высокой клеточно-опосредованной цитотоксической активностью. Изобретение относится к применению таких антител в качестве лекарства для лечения раков и воспалительных заболеваний. Изобретение полезно для продуцирования подтипа моноклонального антитела 1дС1, обладающего высокой клеточно-опосредованной цитотоксической активностью.
Изобретение полезно для продуцирования подтипа моноклонального антитела 1д61, обладающего высокой клеточноопосредованной цитотоксической активностью. Гликопротеины опосредуют многие незаменимые функции у людей, включая катализ, передачу сигнала, межклеточное сообщение и молекулярное распознавание и связывание. Многие гликопротеины применены в терапевтических целях. Олигосахаридный компонент белка может влиять на свойства, релевантные для эффективности терапевтического гликопротеина, включая физическую стабильность, устойчивость к протеазной атаке, взаимодействия с иммунной системой, фармакокинетику и специфическую биологическую активность.
Такие свойства могут зависеть не только от присутствия или отсутствия, но также от специфичных структур олигосахаридов. Например, некоторые олигосахаридные структуры опосредуют быстрый клиренс гликопротеина из кровотока посредством взаимодействий со специфичными белками, связывающими углеводы, тогда как другие могут связываться антителами и запускать нежелательные иммунные реакции 1епк1И8 с! Тгспйк Вю1сс Биологическая активность некоторых 6 иммуноглобулинов зависит от присутствия и от типа гликановой структуры на молекуле и, в частности, на ее Гс-компоненте.
Продемонстрировано влияние присутствия или отсутствия гликансодержащих остатков на способность антитела к взаимодействию с эффекторными молекулами Гс-рецепторами и комплементом. Однако, кроме необходимого присутствия этих гликансодержащих остатков, точнее, необходима гетерогенность их структуры, которая может приводить в результате к различиям в способности к инициации эффекторных функций. Кроме того, олигосахариды могут содержать ноль 60 , один 61 или два 62 6а1 см. Типично существует гетерогенный процессинг сердцевинных олигосахаридных структур, присоединенных при конкретном сайте гликозилирования, так что даже моноклональные антитела существуют в виде множественных гликоформ.
Наблюдали профили галактозилирования, которые являются вариабельными в зависимости от индивидуума человеческие сывороточные 1д Эти различия, вероятно, отражают различия в активности галактозилтрансфераз и других ферментов между клеточными клонами этих индивидуумов 1сГГсг1к с! Подобным образом, показано, что основные различия в гликозилировании антител встречаются между клеточными линиями, и даже минорные различия наблюдают для данной клеточной линии, выращенной в различных условиях культивирования, включая состав культуральной среды, плотность клеток, рН, обогащение кислородом ЫГс1у с! АийЬоШск апй НуЬпйотак. Проведены исследования, чтобы изучить функцию олигосахаридного остатка при биологических активностях антитела.
Воуй с! В настоящее время широкий ряд рекомбинантных белков для терапевтических применений то есть рака, воспалительных заболеваний и т. По терапевтическим и экономическим причинам существует большой интерес в получении высокоспецифичной активности антител. Одним из путей к получению большого прироста эффективностей при сохранении простого способа продуцирования в клеточной линии и потенциального избегания значительных нежелательных побочных эффектов является усиление естественных, клеточно-опосредованных эффекторных функций МаЬ. Следовательно, конструирование олигосахаридов 1дС может привести в результате к оптимизированной АЗКЦ, которую рассматривают как основную функцию некоторых терапевтических антител, хотя антитела обладают множественными терапевтическими функциями например, связывание антигена, индукция апоптоза и комплементзависимая клеточная цитотоксичность КЗКЦ.
Однако все еще остается необходимость в обладании альтернативными способами продуцирования человеческих моноклональных антител в клетке, пригодными для широкомасштабного продуцирования, которые не были схематически разработаны, для экспрессии или для ингибирования соответствующей гликозилтрансферазы, а также такими, которые обеспечивают постоянное гликозилирование человеческого типа с усиленными клеточно-опосредованными эффекторными функциями. Это составляет цель настоящего изобретения. Используя собственный способ см.
В предпочтительном воплощении клетки птиц по настоящему изобретению представляют собой клетки кур или уток. Стадия 1. Несмотря на множество усилий во всем мире, ЭС клетки успешно выделены только из очень ограниченного числа видов мыши, человека, обезьян. Автор изобретения направил значительные ресурсы, накопленные за последние годы, на выделение и получение стабильной линии ЭС клеток из различных видов птиц, в основном из кур и уток. Се11 Тие8 Огдапз.
Затем автор изобретения предложил собственный способ извлечения стабильных, прикрепленных или суспензионных, непрерывных клеточных линий из ЭС клеток птиц. Этот способ включает прогрессивное исключение сыворотки, фидерных клеток и ростовых факторов из клеточной культуральной среды и адаптацию клеток к суспензионной культуре. Эти линии клеток птиц эмбрионального происхождения сохраняли большинство желаемых признаков ЭС клеток то есть неопределенно долгую пролиферацию, экспрессию ЭС-специфичных маркеров, таких как теломераза, стабильность кариотипа , но в дополнение проявляли новые промышленно благоприятные характеристики рост в суспензии в средах, свободных от сыворотки, вплоть до высоких плотностей клеток.
Преимущественно клетки по изобретению способны к пролиферации по меньшей мере 50 поколений, по меньшей мере 75 поколений, по меньшей мере поколений, по меньшей мере поколений, по меньшей мере поколений, по меньшей мере поколений, по меньшей мере поколений, по меньшей мере поколений. Без связи с теорией постулировано, что клетки по изобретению можно культивировать непрерывно настолько долго, насколько теломераза экспрессируется клетками. Под пассажем подразумевают перенос или пересев клеток, с разведением или без разведения, из одного культурального сосуда в другой. Понятно, что в любое время клетки могут быть перенесены из одного сосуда в другой, некоторая часть клеток может быть потеряна, и, следовательно, может иметь место разведение клеток: либо преднамеренное, либо непреднамеренное.
Этот термин является синонимом термину субкультура. Число пассажей равно числу моментов, когда клетки в культуре, которые растут либо в суспензии, либо при прикреплении, субкультивируют или переносят в новый сосуд. Этот термин не является синонимом удвоения популяции или поколения, который представляет собой время, необходимое клеточной популяции для воспроизведения один раз; то есть грубо говоря, время воспроизведения для каждой клетки в популяции. В настоящем изобретении термины клеточная линия и клетки следует использовать без отличия. Термин птичий, птица, ауез или ага, как используют здесь, подразумевают одинаковое значение, и их следует использовать без отличия.
Птицы относятся к любому виду, подвиду или расе организма таксономического класса ага. В предпочтительном воплощении птицы относятся к любому животному таксономического отряда. Отряд пластинчатоклювых содержит примерно видов птиц в трех семействах: ЛпЫшМае шпорцевые гуси , Лпкегапайбае полулапчатый гусь и Апаббае, которое включает более видов водоплавающих птиц, среди них уток, гусей и лебедей. Все виды в этом отряде в высокой степени адаптированы к существованию в водоемах на поверхности воды. Все они являются лапчатоногими для эффективного плавания хотя некоторые впоследствии стали в основном наземными.
Куриные то есть куры, перепела, индюк, фазан и родственные виды. Куриные представляют собой отряд птиц, содержащий кур, индюков, перепелов и фазанов. Примерно видов находится по всему миру. Голубеобразные то есть голубь и родственные виды. Отряд птиц Голубеобразные включает очень широко распространенных горлиц и голубей. В соответствии с предпочтительным воплощением птица по изобретению выбрана среди птиц, которые не содержат провирусных последовательностей вируса лейкоза птиц типа Е АЬУ-Е и эндогенного птичьего вируса ЕАУ в их геноме.
Непете, , 1. Предпочтительно птица выбрана из группы, включающей пластинчатоклювых то есть утку, гуся, лебедя , индюков, перепелов, японских перепелов, цесарок, павлинов. В предпочтительном воплощении птица по настоящему изобретению выбрана среди группы, включающей уток, гусей, лебедей, индюков, перепелов и японских перепелов, цесарок и павлинов. В соответствии с более предпочтительным воплощением птица представляет собой утку, более предпочтительно пекинскую или мускусную утку.
В соответствии с более предпочтительным воплощением птица представляет собой пекинскую утку. Следовательно, в настоящем изобретении предложен способ получения непрерывных диплоидных линий клеток уток, выделенных из эмбриональных стволовых клеток ЭС , где указанные линии клеток уток не продуцируют репликационно-компетентные эндогенные ретровирусные частицы. Согласно второму предпочтительному воплощению птица по изобретению выбрана среди птиц, которые не содержат в их геноме полноразмерных провирусных последовательностей АЬУ-Е, но в конечном счете содержат провирусные последовательности ЕАУ. Специалист в данной области техники способен определить, частичные или полноразмерные последовательности АЬУ-Е и ЕАУ присутствуют в геноме птицы 1о11п5оп апб Непете, Путем скрещивания отобрано несколько линий кур, которые не содержат полноразмерных провирусных последовательностей АЬУ-Е то есть линия еу-0 и, следовательно, не продуцируют инфекционных ретрочастиц АЬУ-Е, таких как:.
Таким образом, клетки, выделенные из птиц еу-0, не продуцируют репликационно-компетентных эндогенных частиц АЬУ-Е. Согласно предпочтительному воплощению птица представляет собой домашнюю курицу еу-0 Са11н5 Са11н5 подвид ботекбсик , предпочтительно выбранную среди ЕЬЬ-0, линии 22, ПЕ и РЕ Обычно куры еу-0 все же содержат провирусную последовательность ЕАУ, но в такой степени, что инфекционные изоляты ЕАУ не идентифицированы. Следовательно, в настоящем изобретении предложен способ получения непрерывных диплоидных линий клеток кур, выбранных из эмбриональных стволовых клеток ЭС линий кур еу-0, где указанные линии клеток кур еу-0 не продуцируют репликационно-компетентные эндогенные ретровирусные частицы.
Предпочтительно птица выбрана из группы, содержащей кур, свободных от особых патогенов 8РЕ , предпочтительно из линии Уа1о. Известно, что у птиц провирусные последовательности АЬУ-Е присутствуют в геноме домашней курицы за исключением кур линии-0 , банкивской. Известно, что у птиц провирусные последовательности ЕЛУ присутствуют у всех родов да11ик, которые включают домашнюю курицу, курицу линии-0, банкивскую джунглевую курицу, зеленую джунглевую курицу, серую джунглевую курицу, цейлонскую джунглевую курицу и родственные виды см. Кекшск е! Под репликационно-компетентным подразумевают, что эндогенные ретровирусные частицы являются инфекционными, то есть что такие ретровирусные частицы способны инфицировать клетки птиц по изобретению и реплицироваться в них.
Последовательность отнятия культуральной среды может быть выбрана среди:. В соответствии с предпочтительным воплощением эмбриональные стволовые клетки птиц согласно стадии а изобретения собирают из птичьих эмбрионов в момент откладки яиц, то есть когда яйцо отложено. Согласно 8еШет е! Сепета1 Могр1ю1оду Иеу. Предпочтительно куриные эмбриональные стволовые ЭС клетки, предпочтительно от линии кур еу-0 стадии а получают путем диссоциации эмбриона ов примерно на стадии X откладка яиц классификации Еуа1-Сйаб1.
Альтернативно птичьи эмбриональные стволовые клетки в соответствии со стадией а по изобретению собирают из эмбриона перед откладкой яйца. Основные ограничения, встречающиеся перед откладкой яйца, составляет тот факт, что яйцо приходится извлекать из кур хирургическим путем и что количество ЭС клеток на эмбрион менее важно. Специалист в данной области техники способен определить временную рамку перед откладкой.
Альтернативно птичьи эмбриональные стволовые клетки в соответствии со стадией а по изобретению можно собирать из эмбриона птицы после откладки яйца вплоть до вылупления. Однако птичьи эмбриональные стволовые клетки прогрессивно вступят в дифференциацию с образованием дифференцированных тканей; однако предпочтительно собирать птичьи ЭС недолго после откладки яйца. Специалист в данной области техники способен определить временную рамку после откладки яйца, которая дает возможность собирать птичьи эмбриональные стволовые клетки. Не связываясь с теорией, определенные условия клеточной культуры птичьих ЭС клеток с последующим прогрессивным отнятием ростовых факторов, фидерного слоя и сыворотки дает возможность адаптировать и отобрать клетки, которые сохраняют большую часть желаемых признаков ЭС клеток стабильность кариотипа, неопределенно долгую пролиферацию, экспрессию маркеров ЭС , но в дополнение проявляют промышленно благоприятные характеристики, такие как рост в суспензии вплоть до высоких плотностей клеток в среде, свободной от сыворотки.
Теломераза составляет один из важнейших маркеров ЭС. Предпочтительно геном указанной птицы не содержит эндогенных провирусных последовательностей, склонных к продуцированию репликационно-компетентных эндогенных ретровирусных частиц;. Предпочтительно исключение всех факторов роста, выбранных из группы, содержащей 1Ь-6, 1Ь-6В, ФСК, ФРФ, из культуральной среды осуществляют одновременно в течение одного пассажа. Предпочтительно исключение факторов роста, выбранных из группы, содержащей ИФР-1 и ЦНТФ, из культуральной среды осуществляют одновременно в течение одного пассажа. Альтернативно исключение ИФР-1 и ЦНТФ проводят путем прогрессивного снижения в течение нескольких пассажей по меньшей мере 2 пассажей и примерно вплоть до 15 пассажей ;. В другом предпочтительном воплощении в базовую культуральную среду на стадии б способа получения непрерывных диплоидных линий клеток птиц согласно настоящему изобретению дополнительно добавляют фактор роста, выбранный из группы, содержащей интерлейкин 6 1Ь-6 , рецептор интерлейкина 6 1Ь-6В , фактор стволовых клеток ФСК и фактор роста фибробластов ФРФ , и указанный способ дополнительно включает стадию г :.
Согласно изобретению базовая культуральная среда означает культуральную среду с классическим составом среды, который сам по себе дает возможность, по меньшей мере, выживания клеток, и, даже лучше, роста клеток. Предпочтительно базовая среда представляет собой синтетическую среду. Кроме того, базовая среда по изобретению может быть дополнена добавками, выбранными из приведенной ниже группы:. Белковый гидролизат не животного происхождения выбран из группы, состоящей из бактериального триптона, дрожжевого триптона, растительных гидролизатов, таких как соевые гидролизаты, или их смесей. В предпочтительном воплощении белковые гидролизаты не животного происхождения представляют собой дрожжевой гидролизат.
Problems of solid radioactive waste management on the example of the radioactive isotope 14C
ZIP архив. ВО 11 - 18, гле Е, Коггкретнгге состдвы гтекоп и их свойства привсдсгц г в тлблггце,Пороговую энергию генерации на ки и дифференциальный КПД лазера в режиме свободной генерации определяли цо следующей методике. Торцы активных элементов не были просветлены. Форма импульса накачки быпл колокщ 1 о" образной.
Активная среда для лазера и способ ее получения
Девушки, кто-нибудь делал лазерную шлифовку лица, чтобы убрать следы от акне или избавиться от морщин? Интересует, как быстро восстанавливается кожа и отношение пост-фактум, стоит ли того сама …. Подскажите пожалуйста , а как ваша подруга лицо после лазера восстановила , сделала 6 био и результата ноль , очень испортили кожу на фракселе. О, знакомая история! Потом под швом еще в двух местах лопались сосуды, их дозашивали уже нитками, которые не рассасываются сами, и швы в этих местах надо было снимать потом.
Написать комментарий